研究肽的每份分析证书都带有纯度百分比，该数字几乎总是由 HPLC 确定。本指南解释了该技术的作用、该百分比是如何产生的，以及最重要的是它没有说明的内容。
HPLC 分离样品的成分并将目标肽表达为 总峰面积的百分比。因此，它是一个比率，而不是称重：残余水和抗衡离子不在视野范围内，并且 HPLC 无法确认 身份 分子的。
什么是高效液相色谱法？
HPLC（高效液相色谱）是一种分离技术，可将样品的成分分开并使每种成分均可测量。 样品被溶解并在高压下通过填充有细颗粒的色谱柱。每种成分对该包装材料都有自己的亲和力，因此需要或多或少的时间才能出现在另一端。
检测器位于色谱柱的末端。它记录通过的内容和时间，结果是色谱图：带有峰的迹线，其中每个峰代表当时洗脱的组分。
HPLC 如何分离肽样品？
对于肽，几乎总是使用反相 HPLC：非极性柱与水性流动相结合，并逐渐添加有机溶剂。 组分的疏水性越强，它在色谱柱上停留的时间就越长，洗脱的时间就越晚。该到达时间称为保留时间。
由于流动相的组成在运行过程中发生变化（梯度），因此疏水性靠得很近的组分仍然会以单独的峰形式出现。这正是您对肽的期望：合成中的相关副产物与目标分子非常相似。
这个纯度百分比从何而来？
纯度百分比是面积百分比：目标肽峰的面积除以所有峰的总面积。 对于肽，检测器通常测量 214 nm 附近的紫外线吸收，即肽键本身吸收的波长，这是有用的，因为这样可以看到所有类似肽的成分，而不仅仅是那些携带芳香族氨基酸的成分。
所以 99.2% 证书 意思是：99.2% 的峰面积属于目标分子，0.8% 属于其他分子。如何阅读此类报告包含在 如何阅读 COA.
纯度与肽含量不同
这是最令人困惑的地方：99% 的纯度并不意味着小瓶中 99% 的内容物是肽。 除了分子本身之外，冻干肽还含有残留的水和反离子——通常是三氟乙酸 (TFA) 或来自肽合成的乙酸盐。这些会增加小瓶中的重量，但不会增加色谱图中的峰面积。
因此，净肽含量是单独测定的，证书可能包含也可能不包含。对于物质的确切数量很重要的研究来说，要关注的是数字，而不是纯度百分比。我们自己的门槛已经开启 质量标准.
HPLC 没有告诉您什么
HPLC 量化但不识别：保留时间与某种物质一致，但无需证明它是哪种物质。 那需要 质谱分析，它测量分子量并因此确认分子身份。这两个测量值合计是考虑批次特征的最小值。
除此之外：纯度测量并不能说明无菌、内毒素或任何应用的适用性。谁来测量我们的批次，以及为什么是第三方，都在关注 贾诺希克分析公司.
此信息本质上是一般性和教育性的。 LYSENTA 提供研究肽 仅用于实验室和研究目的。不适合人类或动物食用，不是药物，也不是医疗建议。
有关 HPLC 的常见问题
HPLC 代表什么？
HPLC 代表高效液相色谱法。这是一种分离技术，其中样品在高压下通过色谱柱，因此其成分在不同时刻到达远端，并且可以单独测量。
HPLC 如何测定纯度？
从色谱图中峰的面积。目标肽峰的面积表示为所有峰总面积的百分比。所以证书上的99.1%是面积百分比，而不是称重。
99% 纯度与小瓶中 99% 的肽相同吗？
不会。HPLC 纯度是目标肽与检测器看到的其他肽相关成分之间的比率。合成过程中残留的水和抗衡离子不计入其中。净肽含量是单独测定的。
HPLC 可以确认它是哪种肽吗？
不是靠它自己。保留时间与物质一致，但不能证明其身份。这需要质谱法来测量分子量。 HPLC 说明多少，质谱说明什么。
