تخبرك نسبة النقاء بكمية الجزيء المستهدف من العينة، ولكن ليس ما إذا كان هذا الجزيء المستهدف موجودًا بالفعل في القارورة. يجيب قياس الطيف الكتلي على هذا السؤال. يشرح هذا الدليل كيفية عمله ولماذا يحتاج القياسان إلى بعضهما البعض.
قياس الطيف الكتلي يزن الجزيئات: فهو يقيس نسبة الكتلة إلى الشحن من الجسيمات المتأينة، ويتبع ذلك الوزن الجزيئي. إذا كان ذلك مطابقًا للتسلسل، تم تأكيد الهوية. فهو لا ينتج نسبة نقاء، وهذه تظل مهمة HPLC.
ما هو قياس الطيف الكتلي؟
قياس الطيف الكتلي (MS) هو تقنية تعمل على تأين الجزيئات ثم فرزها حسب نسبة الكتلة إلى الشحنة (m/z). والنتيجة هي طيف: سلسلة من الإشارات على طول المحور m/z، حيث يكشف موضع الإشارة عن كتلة الأيون المقابل.
بالنسبة للببتيدات، يتم عادةً استخدام تقنية التأين الناعم، عادةً التأين بالرش الكهربائي (ESI). لينة تعني أن الجزيء يدخل في الطور الغازي ويلتقط الشحنة دون أن ينهار. بالضبط ما تريده عندما يكون الوزن الجزيئي للببتيد السليم هو السؤال.
كيف يتبع الوزن الجزيئي من ذلك؟
يتم حساب الوزن الجزيئي مرة أخرى من قيم m/z المقاسة وعدد الشحنات، ثم تتم مقارنته بالوزن الذي يشير إليه تسلسل الأحماض الأمينية. يجب أن يتفق هذان الشخصان بفارق بسيط. انحرف أكثر وشيء آخر غير ما تقوله التسمية موجود في القارورة - أو ليس هذا فقط.
في ظل ESI، غالبًا ما تلتقط الببتيدات أكثر من شحنة واحدة، لذلك يظهر الجزيء نفسه في عدة مواضع في الطيف: عند كتلته مقسومة على شحنة واحدة، على اثنتين، على ثلاثة. وهذا ليس تلوثًا، بل هو خاصية لهذه التقنية، وهذه السلسلة بالتحديد هي التي تجعل الحساب موثوقًا.
الوزن الجزيئي في المواصفات على أ صفحة المنتج هي القيمة النظرية من التسلسل. القيمة المقاسة لدفعة معينة موجودة على شهادة.
HPLC وMS: ما الذي يقيس ماذا؟
تجيب التقنيتان على أسئلة مختلفة، ولا يتم تصنيف الدفعة إلا بعد الانتهاء من كليهما.
ولهذا السبب تحتوي شهادة التحليل الجادة على كليهما. المزيد عن الجانب الانفصالي موجود ما هو HPLC; عتباتنا قيد التشغيل معايير الجودة.
ما الذي لا يخبرك به قياس الطيف الكتلي؟
لا يستطيع طيف الكتلة التمييز بين المواد التي تشترك في الوزن الجزيئي. جزيئين لهما نفس الصيغة ولكن ببنية مختلفة - بما في ذلك المبادلة في ترتيب الأحماض الأمينية - يزنان نفس الوزن تمامًا. ورؤية ذلك تتطلب التجزئة، حيث يتم تقسيم الجزيء عمدًا وتكشف الأجزاء عن التسلسل.
وتمامًا مثل قياس النقاء، لا يقول الطيف شيئًا عن العقم أو السموم الداخلية أو الملاءمة لأي تطبيق. لماذا نقوم بهذه القياسات من قبل طرف ثالث قيد التشغيل جانوشيك التحليلي; التحقق من دفعة محددة عبر التحقق من عدد الكثير.
هذه المعلومات عامة وتعليمية بطبيعتها. توفر LYSENTA الببتيدات البحثية للأغراض المختبرية والبحثية فقط. ليس للاستهلاك البشري أو الحيواني، وليس دواء وليس نصيحة طبية.
الأسئلة المتداولة حول قياس الطيف الكتلي
ماذا يفعل قياس الطيف الكتلي للببتيد؟
يقيس مطياف الكتلة نسبة الكتلة إلى الشحنة للجزيئات المتأينة، ويتبع ذلك الوزن الجزيئي. إذا كان الوزن المقاس يطابق الوزن الذي يشير إليه تسلسل الأحماض الأمينية، فهذا تأكيد على أن الجزيء المقصود موجود في القارورة.
ما هو الفرق بين HPLC ومطياف الكتلة؟
يقوم HPLC بفصل مكونات العينة وتحديد النسبة المئوية للببتيد المستهدف – كم. يؤكد قياس الطيف الكتلي الهوية الجزيئية والوزن الجزيئي – ماذا. إنهم يقيسون أشياء مختلفة ولا يستبدلون بعضهم البعض.
لماذا توجد عدة قمم في الطيف الكتلي لببتيد واحد؟
غالبًا ما تلتقط الببتيدات شحنات متعددة أثناء التأين. ثم يظهر جزيء واحد في عدة مواضع في الطيف، في كل مرة تكون كتلته مقسومة على عدد الشحنات. يتم حساب الوزن الجزيئي الواحد من تلك السلسلة.
هل يثبت قياس الطيف الكتلي أن الببتيد نقي؟
لا، الطيف يؤكد الهوية، وليس نسبة النقاء. لا يمكن التمييز بين مادتين لهما نفس الوزن الجزيئي عن طريق القياس العادي. HPLC هو ما ينتج رقم النقاء.
