Un porcentaje de pureza le indica qué cantidad de una muestra es la molécula objetivo, pero no si esa molécula objetivo está realmente en el vial. La espectrometría de masas responde a esa pregunta. Esta guía explica cómo funciona y por qué las dos medidas se necesitan entre sí.
La espectrometría de masas pesa moléculas: mide la relación masa-carga de partículas ionizadas, y sigue el peso molecular. Si eso coincide con la secuencia, se confirma la identidad. No produce un porcentaje de pureza; ese sigue siendo trabajo del HPLC.
¿Qué es la espectrometría de masas?
La espectrometría de masas (MS) es una técnica que ioniza moléculas y luego las clasifica según su relación masa-carga (m/z). El resultado es un espectro: una serie de señales a lo largo del eje m/z, donde la posición de una señal revela la masa del ion correspondiente.
Para los péptidos se suele utilizar una técnica de ionización suave, normalmente ionización por electropulverización (ESI). Suave significa que la molécula entra en la fase gaseosa y recoge una carga sin desmoronarse. Exactamente lo que desea cuando la cuestión es el peso molecular del péptido intacto.
¿Cómo se deduce de esto un peso molecular?
El peso molecular se calcula a partir de los valores m/z medidos y el número de cargas, y luego se compara con el peso implícito en la secuencia de aminoácidos. Esos dos tienen que estar de acuerdo dentro de un pequeño margen. Si se desvía más, habrá algo distinto a lo que dice la etiqueta en el vial, o no sólo eso.
Bajo ESI los péptidos a menudo recogen más de una carga, por lo que la misma molécula aparece en varias posiciones del espectro: en su masa dividida por una carga, por dos, por tres. Esto no es contaminación sino una propiedad de la técnica, y es precisamente esa serie la que hace que el cálculo sea fiable.
El peso molecular en las especificaciones de un página del producto es el valor teórico de la secuencia. El valor medido para un lote específico se encuentra en la certificado.
HPLC y MS: ¿qué mide qué?
Las dos técnicas responden a preguntas diferentes y un lote sólo se caracteriza una vez que se han realizado ambas.
Por eso un certificado de análisis serio contiene ambos. Más sobre el lado de la separación está en ¿Qué es la HPLC?; Nuestros umbrales están en estándares de calidad.
Lo que la espectrometría de masas no te dice
Un espectro de masas no puede distinguir sustancias que comparten un peso molecular. Dos moléculas con la misma fórmula pero con una estructura diferente (incluido un intercambio en el orden de los aminoácidos) pesan exactamente lo mismo. Verlo requiere fragmentación, donde la molécula se rompe deliberadamente y los fragmentos revelan la secuencia.
Y al igual que una medición de pureza, un espectro no dice nada sobre esterilidad, endotoxinas o idoneidad para cualquier aplicación. ¿Por qué hacemos que esas mediciones sean realizadas por un tercero? Janoshik Analítico; comprobar un lote específico mediante verificar un número de lote.
Esta información es de naturaleza general y educativa. LYSENTA suministra péptidos de investigación Sólo para fines de laboratorio y de investigación.. No para consumo humano o animal, ni medicamento ni consejo médico.
Preguntas frecuentes sobre espectrometría de masas
¿Qué hace la espectrometría de masas por un péptido?
La espectrometría de masas mide la relación masa-carga de moléculas ionizadas y de ahí se deriva el peso molecular. Si el peso medido coincide con el peso implícito en la secuencia de aminoácidos, esa es la confirmación de que la molécula deseada está en el vial.
¿Cuál es la diferencia entre HPLC y espectrometría de masas?
La HPLC separa los componentes de una muestra y determina qué porcentaje es el péptido objetivo: cuánto. La espectrometría de masas confirma la identidad molecular y el peso molecular: qué. Miden cosas diferentes y no se reemplazan entre sí.
¿Por qué hay varios picos en el espectro de masas de un solo péptido?
Los péptidos suelen adquirir múltiples cargas durante la ionización. Luego, una molécula aparece en varias posiciones del espectro, cada vez con su masa dividida por el número de cargas. A partir de esa serie se calcula un único peso molecular.
¿La espectrometría de masas demuestra que un péptido es puro?
No. Un espectro confirma la identidad, no un porcentaje de pureza. Dos sustancias con el mismo peso molecular no pueden diferenciarse mediante una medición ordinaria. HPLC es lo que produce la cifra de pureza.
