Uma porcentagem de pureza informa quanto de uma amostra é a molécula alvo – mas não se essa molécula alvo está realmente no frasco. A espectrometria de massa responde a essa pergunta. Este guia explica como funciona e por que as duas medidas precisam uma da outra.
A espectrometria de massa pesa moléculas: mede a relação massa-carga de partículas ionizadas, e o peso molecular segue. Se isso corresponder à sequência, identidade é confirmada. Ele não produz uma porcentagem de pureza – esse continua sendo o trabalho da HPLC.
O que é espectrometria de massa?
A espectrometria de massa (MS) é uma técnica que ioniza moléculas e depois as classifica pela sua relação massa-carga (m/z). O resultado é um espectro: uma série de sinais ao longo do eixo m/z, onde a posição de um sinal revela a massa do íon correspondente.
Para peptídeos, uma técnica de ionização suave é normalmente usada, geralmente ionização por eletrospray (ESI). Suave significa que a molécula entra na fase gasosa e adquire carga sem se desintegrar. Exatamente o que você deseja quando a questão é o peso molecular do peptídeo intacto.
Como o peso molecular segue disso?
O peso molecular é calculado a partir dos valores m/z medidos e do número de cargas, depois comparado com o peso implícito na sequência de aminoácidos. Esses dois têm que concordar dentro de uma pequena margem. Desvie ainda mais e algo diferente do que o rótulo diz está no frasco – ou não apenas isso.
Sob ESI, os peptídeos geralmente captam mais de uma carga, de modo que a mesma molécula aparece em diversas posições do espectro: em sua massa dividida por uma carga, por duas, por três. Isto não é contaminação, mas uma propriedade da técnica, e é precisamente essa série que torna o cálculo confiável.
O peso molecular nas especificações de um página do produto é o valor teórico da sequência. O valor medido para um lote específico está na certificado.
HPLC e MS: o que mede o quê?
As duas técnicas respondem a questões diferentes, e um lote só é caracterizado depois de ambas terem sido realizadas.
É por isso que um certificado de análise sério contém ambos. Mais sobre o lado da separação está em o que é HPLC; nossos limites estão ativados padrões de qualidade.
O que a espectrometria de massa não diz
Um espectro de massa não consegue distinguir substâncias que compartilham um peso molecular. Duas moléculas com a mesma fórmula, mas com uma estrutura diferente – incluindo uma troca na ordem dos aminoácidos – pesam exatamente o mesmo. Ver através disso requer fragmentação, onde a molécula é deliberadamente quebrada e os fragmentos revelam a sequência.
E assim como uma medição de pureza, um espectro não diz nada sobre esterilidade, endotoxinas ou adequação para qualquer aplicação. O motivo pelo qual essas medições são feitas por terceiros está em Janoshik Analítica; verifique um lote específico via verificar um número de lote.
Esta informação é de natureza geral e educativa. LYSENTA fornece peptídeos de pesquisa apenas para fins laboratoriais e de pesquisa. Não é para consumo humano ou animal, não é um medicamento e não é um conselho médico.
Perguntas frequentes sobre espectrometria de massa
O que a espectrometria de massa faz com um peptídeo?
A espectrometria de massa mede a relação massa-carga das moléculas ionizadas, e o peso molecular decorre disso. Se o peso medido corresponder ao peso implícito na sequência de aminoácidos, isso é a confirmação de que a molécula pretendida está no frasco.
Qual é a diferença entre HPLC e espectrometria de massa?
A HPLC separa os componentes de uma amostra e determina qual porcentagem é o peptídeo alvo – quanto. A espectrometria de massa confirma a identidade molecular e o peso molecular – o quê. Eles medem coisas diferentes e não se substituem.
Por que existem vários picos no espectro de massa de um único peptídeo?
Os peptídeos geralmente adquirem múltiplas cargas durante a ionização. Uma molécula aparece então em diversas posições do espectro, cada vez com sua massa dividida pelo número de cargas. Um único peso molecular é calculado a partir dessa série.
A espectrometria de massa prova que um peptídeo é puro?
Não. Um espectro confirma a identidade, não uma percentagem de pureza. Duas substâncias com o mesmo peso molecular não podem ser diferenciadas por uma medição comum. HPLC é o que produz o valor de pureza.
