Процент чистоты говорит вам, какая часть образца является целевой молекулой, но не показывает, действительно ли эта целевая молекула находится во флаконе. Масс-спектрометрия отвечает на этот вопрос. В этом руководстве объясняется, как это работает и почему эти два измерения необходимы друг другу.
Масс-спектрометрия взвешивает молекулы: она измеряет соотношение массы к заряду ионизированных частиц, а затем следует молекулярная масса. Если это соответствует последовательности, личность подтверждена. Он не определяет процент чистоты — это остается задачей ВЭЖХ.
Что такое масс-спектрометрия?
Масс-спектрометрия (МС) — это метод, который ионизирует молекулы, а затем сортирует их по отношению массы к заряду (m/z). Результатом является спектр: серия сигналов вдоль оси m/z, где положение сигнала показывает массу соответствующего иона.
Для пептидов обычно используется метод мягкой ионизации, обычно ионизация электрораспылением (ESI). Мягкость означает, что молекула переходит в газовую фазу и набирает заряд, не распадаясь. Именно то, что вам нужно, когда речь идет о молекулярной массе интактного пептида.
Как из этого следует молекулярная масса?
Молекулярная масса рассчитывается на основе измеренных значений m/z и количества зарядов, а затем сравнивается с массой, подразумеваемой аминокислотной последовательностью. Эти двое должны прийти к согласию с небольшим отрывом. Отклонитесь еще дальше, и во флаконе окажется что-то иное, чем указано на этикетке, или не только это.
При ESI пептиды часто приобретают более одного заряда, поэтому одна и та же молекула появляется в нескольких положениях спектра: при ее массе, разделенной на один заряд, на два, на три. Это не загрязнение, а свойство техники, и именно этот ряд делает расчет достоверным.
Молекулярная масса в характеристиках на страница продукта — теоретическое значение из последовательности. Измеренное значение для конкретной партии указано на сертификат.
ВЭЖХ и МС: что измеряет?
Эти два метода отвечают на разные вопросы, и партия характеризуется только после того, как оба метода выполнены.
Вот почему серьезный сертификат анализа содержит и то, и другое. Подробнее о стороне разделения см. что такое ВЭЖХ; наши пороги включены стандарты качества.
О чем масс-спектрометрия не расскажет
Масс-спектр не может различать вещества, имеющие общую молекулярную массу. Две молекулы с одинаковой формулой, но разной структурой (включая перестановку порядка аминокислот) весят одинаково. Чтобы увидеть это, необходима фрагментация, когда молекула намеренно разрывается на части, и фрагменты раскрывают последовательность.
И, как и при измерении чистоты, спектр ничего не говорит о стерильности, наличии эндотоксинов или пригодности для какого-либо применения. Почему мы поручаем эти измерения третьей стороне, находится на Яношик Аналитик; проверить конкретную партию через проверить номер лота.
Данная информация носит общий и образовательный характер. LYSENTA поставляет исследовательские пептиды только для лабораторных и исследовательских целей. Не для потребления человеком или животными, не в качестве лекарства и не для медицинских консультаций.
Часто задаваемые вопросы о масс-спектрометрии
Что делает масс-спектрометрия для пептида?
Масс-спектрометрия измеряет отношение массы к заряду ионизированных молекул, из чего следует молекулярная масса. Если измеренный вес соответствует весу, указанному в аминокислотной последовательности, это является подтверждением того, что во флаконе находится предполагаемая молекула.
В чем разница между ВЭЖХ и масс-спектрометрией?
ВЭЖХ разделяет компоненты образца и определяет, какой процент составляет целевой пептид — сколько. Масс-спектрометрия подтверждает молекулярную идентичность и молекулярную массу — что. Они измеряют разные вещи и не заменяют друг друга.
Почему в масс-спектре одного пептида имеется несколько пиков?
Пептиды часто приобретают несколько зарядов во время ионизации. Затем одна молекула появляется в нескольких положениях спектра, каждый раз с массой, деленной на количество зарядов. Единая молекулярная масса рассчитывается на основе этого ряда.
Доказывает ли масс-спектрометрия чистоту пептида?
Нет. Спектр подтверждает идентичность, а не процент чистоты. Два вещества с одинаковой молекулярной массой невозможно отличить обычными измерениями. ВЭЖХ позволяет получить показатель чистоты.
