Un pourcentage de pureté vous indique quelle quantité d’échantillon contient la molécule cible, mais pas si cette molécule cible se trouve réellement dans le flacon. La spectrométrie de masse répond à cette question. Ce guide explique comment cela fonctionne et pourquoi les deux mesures ont besoin l'une de l'autre.
La spectrométrie de masse pèse les molécules : elle mesure la rapport masse/charge de particules ionisées, et le poids moléculaire suit. Si cela correspond à la séquence, l'identité est confirmée. Elle ne produit pas de pourcentage de pureté – cela reste le travail de la HPLC.
Qu'est-ce que la spectrométrie de masse ?
La spectrométrie de masse (MS) est une technique qui ionise les molécules puis les trie selon leur rapport masse/charge (m/z). Le résultat est un spectre : une série de signaux le long de l’axe m/z, où la position d’un signal révèle la masse de l’ion correspondant.
Pour les peptides, une technique d'ionisation douce est généralement utilisée, généralement l'ionisation par électrospray (ESI). Doux signifie que la molécule entre dans la phase gazeuse et capte une charge sans se désagréger. Exactement ce que vous voulez lorsque le poids moléculaire du peptide intact est la question.
Comment un poids moléculaire en découle-t-il ?
Le poids moléculaire est calculé à partir des valeurs m/z mesurées et du nombre de charges, puis comparé au poids impliqué par la séquence d'acides aminés. Ces deux-là doivent s’entendre avec une petite marge. Déviez davantage et quelque chose d'autre que ce que l'étiquette indique est dans le flacon - ou pas seulement.
Sous ESI, les peptides captent souvent plus d'une charge, de sorte que la même molécule apparaît à plusieurs positions dans le spectre : sa masse est divisée par une charge, par deux, par trois. Il ne s’agit pas d’une contamination mais d’une propriété de la technique, et c’est précisément cette série qui rend le calcul fiable.
Le poids moléculaire dans les spécifications sur un fiche produit est la valeur théorique de la séquence. La valeur mesurée pour un lot spécifique se trouve sur le certificat.
HPLC et MS : qu'est-ce qui mesure quoi ?
Les deux techniques répondent à des questions différentes, et un lot n’est caractérisé qu’une fois les deux réalisées.
C'est pourquoi un certificat d'analyse sérieux contient les deux. Plus d'informations sur la séparation sont disponibles qu'est-ce que la HPLC; nos seuils sont activés normes de qualité.
Ce que la spectrométrie de masse ne vous dit pas
Un spectre de masse ne peut pas distinguer les substances partageant un poids moléculaire. Deux molécules ayant la même formule mais une structure différente – y compris un échange dans l’ordre des acides aminés – pèsent exactement le même. Pour comprendre cela, il faut une fragmentation, où la molécule est délibérément brisée et les fragments révèlent la séquence.
Et tout comme une mesure de pureté, un spectre ne dit rien sur la stérilité, les endotoxines ou l'adéquation à une application. La raison pour laquelle nous faisons effectuer ces mesures par un tiers est la suivante Janoshik analytique; vérifier un lot spécifique via vérifier un numéro de lot.
Ces informations sont de nature générale et pédagogique. LYSENTA fournit des peptides de recherche à des fins de laboratoire et de recherche uniquement. Non destiné à la consommation humaine ou animale, ni médicament ni avis médical.
Questions fréquemment posées sur la spectrométrie de masse
Que fait la spectrométrie de masse pour un peptide ?
La spectrométrie de masse mesure le rapport masse/charge des molécules ionisées, et le poids moléculaire en découle. Si le poids mesuré correspond au poids impliqué par la séquence d’acides aminés, cela confirme que la molécule prévue est dans le flacon.
Quelle est la différence entre HPLC et spectrométrie de masse ?
La HPLC sépare les composants d’un échantillon et détermine quel pourcentage représente le peptide cible – quelle quantité. La spectrométrie de masse confirme l'identité moléculaire et le poids moléculaire - quoi. Ils mesurent des choses différentes et ne se remplacent pas.
Pourquoi y a-t-il plusieurs pics dans le spectre de masse d’un même peptide ?
Les peptides captent souvent plusieurs charges lors de l'ionisation. Une molécule apparaît alors à plusieurs positions du spectre, à chaque fois avec sa masse divisée par le nombre de charges. Un seul poids moléculaire est calculé à partir de cette série.
La spectrométrie de masse prouve-t-elle qu’un peptide est pur ?
Non. Un spectre confirme l’identité, pas un pourcentage de pureté. Deux substances ayant le même poids moléculaire ne peuvent être distinguées par une mesure ordinaire. La HPLC est ce qui produit le chiffre de pureté.
